疏水層析，是根據(jù)不同的蛋白與疏水表面產(chǎn)生的相互作用的差異，進(jìn)行蛋白分離的一種方法。一般而言，離子強(qiáng)度（鹽濃度）越高，物質(zhì)所形成的疏水鍵越強(qiáng)。影響疏水作用的因素包括：鹽濃度，溫度，pH，表面活化劑和有機(jī)溶劑。疏水層析的應(yīng)用與離子交換層析的應(yīng)用剛好互補(bǔ)，因此，可以用于分離離子交換層析很難或不能分離的物質(zhì)。

Chisso 公司生產(chǎn)的疏水層析填料，有三種類型：CellfineTM Butyl, Phenyl 和 Octyl，分別為在多孔的交聯(lián)纖維素顆粒上通過(guò)一個(gè)短接頭，共價(jià)鍵和丁基，苯基或者辛基的層析填料。

填料的疏水性按丁基、苯基、辛基，疏水性程度依次增大。通常，CellfineTM Octyl 對(duì)疏水性蛋白的吸附性會(huì)強(qiáng)于 CellfineTM Butyl 對(duì)疏水性蛋白的吸附。然而，蛋白被吸附的越厲害，也就越難洗脫。CellfineTM Phenyl，具芳香族物質(zhì)的特性，因此，在某些情況下，可以更好地吸附丁基和辛基等脂肪族所不能吸附的物質(zhì)。在使用疏水層析分離物質(zhì)時(shí)，沒(méi)有通法，只能根據(jù)待分離物質(zhì)的特性，篩選合適的填料，摸索優(yōu)化其分離純化的條件。

Asahipak NH2P 色譜柱是 Shodex 公司生產(chǎn)的用于分析糖類物質(zhì)的正相柱。Asahipak NH2P 色譜柱，是以聚合物為基材的氨基柱，化學(xué)穩(wěn)定性良好，在 pH2-13 的條件下均可使用。與硅膠基材的氨基柱相比，聚合物基材的氨基柱 Asahipak NH2P，可以很好地實(shí)現(xiàn)硅膠基材氨基柱的各種應(yīng)用；對(duì)流動(dòng)相的耐受性更好，使用壽命更長(zhǎng)久；另外，Asahipak NH2P 可用于定量分析；還可以用堿性溶劑沖洗。

導(dǎo)致色譜柱柱壓升高的原因及解決方案

第一階段：確認(rèn)是柱子導(dǎo)致的壓力上升，還是 HPLC 系統(tǒng)導(dǎo)致的壓力上升。

由于 HPLC 系統(tǒng)有很多環(huán)節(jié)，如泵、管路等，都容易吸附和積聚雜質(zhì)，這些因素均會(huì)導(dǎo)致壓力上升，所以，應(yīng)先對(duì) HPLC 系統(tǒng)進(jìn)性排查。

排查方法：取下色譜柱，僅用管路連接并正常輸送流動(dòng)相時(shí)記錄系統(tǒng)壓力。如果此時(shí) HPLC 系統(tǒng)壓力正常，則考慮是柱壓升高。

第二階段：確定是否使用了保護(hù)柱（預(yù)柱）。

一般在測(cè)定容易堵塞色譜柱的樣品時(shí)，應(yīng)該使用保護(hù)柱。如果使用了保護(hù)柱，那么壓力的升高就有可能是保護(hù)柱的柱壓升高導(dǎo)致的。

排查方法：取下色譜柱，僅以保護(hù)柱連接管路并正常輸送流動(dòng)相測(cè)試柱壓，再反過(guò)來(lái)取下保護(hù)柱僅以色譜柱連接管路正常輸送流動(dòng)相測(cè)試柱壓，如果僅當(dāng)連接保護(hù)柱時(shí)柱壓高的話，則為保護(hù)柱引起的柱壓升高，請(qǐng)清洗、或更換保護(hù)柱。

第三階段：如果不是上述第一、第二點(diǎn)原因造成壓力升高，就可以確認(rèn)是色譜柱的原因了。

如果柱壓是隨著使用時(shí)間的延長(zhǎng)，慢慢上升，這屬于正常現(xiàn)象，是色譜柱達(dá)到使用壽命了，只能更換色譜柱了。